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cKI小鼠模型

簡要描述:cKI小鼠模型(Conditional Knockin,條件性基因敲入)是一種利用基因編輯技術實現(xiàn)時空特異性表達的轉基因小鼠模型,其核心原理是通過Cre-LoxP系統(tǒng)控制外源基因在特定組織或發(fā)育階段的激活

  • 更新時間:2025-06-30
  • 瀏覽次數(shù):421

詳細介紹

1. cKI小鼠模型的定義與核心原理

cKI(條件性敲入) 是在傳統(tǒng)KI(Knock-In)基礎上引入時空特異性調控的基因編輯模型,通過Cre-loxP系統(tǒng)實現(xiàn)基因表達的精準控制:

  • 核心元件

    • LoxP-STOP-LoxP(LSL) :插入靶基因前的轉錄終止序列,阻斷基因表達;Cre酶切除STOP后激活表達 。

    • 組織特異性Cre工具鼠:驅動特定細胞/器官中Cre重組酶的表達(如Alb-Cre用于肝臟特異性表達)。

  • 技術優(yōu)勢

    • 避免全身表達導致的發(fā)育致死或非靶向效應

    • 模擬疾病相關基因的局部病理微環(huán)境 


2. 核心構建策略與流程

(1)CRISPR/Cas9介導的cKI模型構建

步驟操作要點技術挑戰(zhàn)
載體設計在靶基因位點插入LSL-目的基因(如報告基因/人類基因片段)大片段插入(>10kb)效率低 
受精卵編輯Cas9/sgRNA與同源重組模板共注射至受精卵F0代嵌合體需分line篩選 
繁育策略F0嵌合體 × 野生型 → F1雜合子 × Cre工具鼠 → 組織特異性表達子代 Cre滲漏表達需嚴格驗證

(2)經(jīng)典案例解析

  • 報告基因示蹤模型

    • B-CAG-Upar-tdTomato cKI:LSL阻斷mUPAR與tdTomato表達;CMV-Cre激活后實現(xiàn)全組織示蹤 。

    • Cubn-sGFP-P2A-nLacZ:腎臟特異性熒光標記 。

  • 疾病人源化模型

    • B6-hLPA(CKI)/Alb-cre:肝臟特異性表達人源LPA基因,模擬高血脂與動脈粥樣硬化 。


3. 核心應用場景

(1)精準疾病機制研究

疾病領域模型案例研究價值
心血管疾病B6-hLPA(CKI)/Alb-cre揭示Lp(a)介導的血栓形成機制 
神經(jīng)退行性疾病HdhQ150 cKI (亨廷頓病)解析CAG重復擴展的神經(jīng)元毒性 
腫瘤微環(huán)境B-PD-1-EGFP cKI實時追蹤免疫檢查點蛋白動態(tài) 

 

(2)藥物研發(fā)平臺

  • 靶點驗證:人源化CYP450 cKI模型預測藥物代謝毒性 。

  • 藥效評價:fu方苦參注射液(CKI)在放射性肺損傷模型中的抗炎機制 。

(3)前沿技術整合

  • 光遺傳學調控:結合ChR2(光敏感通道)cKI小鼠精準操控神經(jīng)回路 。

  • 單細胞測序驗證:scRNA-seq分析cKI模型腫瘤微環(huán)境重塑


4. 技術優(yōu)勢與局限性

優(yōu)勢

  • 時空精準性:克服傳統(tǒng)KI模型的全身表達局限性 。

  • 生理相關性:保留內源基因調控機制(如啟動子特異性)。

  • 多功能拓展:支持雙報告基因(如EGFP+tdTomato)或多基因共編輯 。

局限性

  • 技術復雜度:需同步優(yōu)化Cas9編輯效率與同源重組設計 。

  • Cre工具鼠限制:組織特異性Cre活性不足或滲漏表達影響結果 。

  • 周期與成本:從構建到表型分析需6-12個月 。

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