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簡要描述：鬼筆環(huán)肽染色實驗鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是一種從毒蘑菇Amanita phalloides中分離出來的多肽物質，它能夠與細胞中的肌動蛋白絲（F-actin）結合，從而用于細胞骨架的染色。鬼筆環(huán)肽與F-actin的結合是高度特異性的，不會與肌動蛋白單體（G-actin）結合，因此它是研究細胞骨架的重要工具。通過使用熒光標記的鬼筆環(huán)肽，可以在熒光顯微鏡下觀察細胞中微絲的分布和形態(tài)。
更新時間：2024-11-05瀏覽次數(shù)：1571詳細介紹
鬼筆環(huán)肽染色實驗
鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是一種從毒蘑菇Amanita phalloides中分離出來的多肽物質，它能夠與細胞中的肌動蛋白絲（F-actin）結合，從而用于細胞骨架的染色。
鬼筆環(huán)肽與F-actin的結合是高度特異性的，不會與肌動蛋白單體（G-actin）結合，因此它是研究細胞骨架的重要工具。通過使用熒光標記的鬼筆環(huán)肽，可以在熒光
顯微鏡下觀察細胞中微絲的分布和形態(tài)。
鬼筆環(huán)肽染色實驗步驟
1.配制鬼筆環(huán)肽溶液：通常將0.1mg的鬼筆環(huán)肽溶于1ml無水甲醇中（也可以使用DMSO或無水乙醇），配成貯存液，并在-20°C避光條件下保存。
工作液的濃度通常為5μg/ml，通過將貯存液用PBS稀釋20倍來制備。
2.細胞固定：使用3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定細胞20分鐘，然后用PBS清洗細胞2次。
3.染色：加入5μg/ml的熒光標記鬼筆環(huán)肽，室溫染色30-60分鐘，然后再次用PBS清洗細胞2次。
4.細胞核染色：可以使用DAPI或Hoechst等染料對細胞核進行染色，染色時間通常為10分鐘，之后再次用PBS清洗細胞2次。
5.封片：吸去多余水分后，加入熒光封片液（中性或偏堿性緩沖液加等量甘油），蓋上蓋玻片，準備在熒光或共聚焦顯微鏡下觀察。
注意事項
1.鬼筆環(huán)肽的分子量小，可以輕易穿透細胞膜，因此通常不需要對細胞進行冷丙酮和Triton X-100處理。
2.鬼筆環(huán)肽具有毒性，操作時應戴手套并在通風良好的環(huán)境中進行。
3.鬼筆環(huán)肽染色可以與抗體染色結合使用，以同時觀察細胞骨架和其他細胞結構。
4.避免使用含有甲醇或丙酮的固定劑，因為這些固定劑會破壞肌動蛋白的結構，影響染色效果。
應用
廣泛應用于細胞生物學研究，包括細胞形態(tài)學、細胞運動、細胞分裂以及細胞與細胞之間的相互作用等領域。
通過觀察F-actin的分布，研究人員可以更好地理解細胞的功能和病理過程。
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