小鼠脾臟單細(xì)胞分離

簡(jiǎn)要描述：小鼠脾臟單細(xì)胞分離：?jiǎn)渭?xì)胞分離法是一種從待分離的材料中直接分離單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)的方法。

更新時(shí)間：2022-12-23
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實(shí)驗(yàn)

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詳細(xì)介紹

1 物理方法
又稱(chēng)機(jī)械法,分為3種:(1)研磨法，即通過(guò)簡(jiǎn)單研磨后過(guò)濾去除雜質(zhì)。本法一般針對(duì)脆性較大的組織,雖簡(jiǎn)單易行,但對(duì)細(xì)胞損傷較大,且經(jīng)過(guò)濾獲得的細(xì)胞純度不高;(2)振蕩法,即通過(guò)振蕩后過(guò)濾獲得細(xì)胞懸液,一般針對(duì)細(xì)胞間聯(lián)接不是非常緊密的組織;(3)直接分離法：本法所得細(xì)胞產(chǎn)量較高,形態(tài)完整,分散度好，雜質(zhì)少,但活性與功能較差,且隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),活性及功能逐漸下降,不適于一些持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究。
2 化學(xué)方法
又稱(chēng)鰲合法,即利用一些特殊的化學(xué)試劑破壞細(xì)胞間的聯(lián)接。Ca2+、Mg2+等在細(xì)胞間橋粒聯(lián)接中起重要作用，鰲合劑(EDTA、EGTA、檸檬酸鹽等)結(jié)合了這些離子后，可使橋粒聯(lián)接斷開(kāi),有利于細(xì)胞分離。本法單獨(dú)使用效果較差,常與酶消化法結(jié)合使用。
3 生物方法
使用普遍的是酶消化法,即利用特定的酶溶液溶解、破壞細(xì)胞間蛋白聯(lián)接,是目前分離獲取游離組織細(xì)胞常用的方法。根據(jù)不同細(xì)胞不同的蛋白聯(lián)接應(yīng)選用不同的酶種類(lèi)。膠原蛋白在高等動(dòng)物機(jī)體中含量豐富,是動(dòng)物和人體皮膚、血管.骨胳等組織的主要基質(zhì),故常用的是膠原酶法。膠原蛋白有很多種類(lèi)型,其對(duì)應(yīng)的酶也各不相同。位于基底膜的第IV型膠原蛋白是維持細(xì)胞養(yǎng)分和其他正常代謝的重要關(guān)鍵,故破壞此蛋白一般即可達(dá)到分離的目的。

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